基于代谢组学方法寿胎丸药效基础及安胎作用机制研究

Based on the previous research(Study on the effects of Shoutaiwan to the decidual proteome of recurrent spontaneous abortion mice- - The national natural science funds 30973771),we continue to establish rats model of deficiency of kidney and corpus luteum inhibit abortion, choosing Shoutaiwan and its active components as study factors,using the metabolomic research methods ,and to study the related changes of those rats model and the effect of Shoutaiwan and its active components.With NMR,LC-MS,LC-TOF/MS,GC-MS,HPLC-DAD,Bioinformatics and other modern technologies,and the analysis of plasma and urine metabolome,to respectively get the metabolites fingerprint map of model rats ,Shoutaiwan and its active components before and after the durg;analyse the reasons of these changes,to find the metabonomics characteristics and small molecular mark compounds which are closely related to rats model,Shoutaiwan and its active components;clarify drug targets and mechanism,discuss the pharmacodynamic material basis and tocolysis mechanism of Shoutaiwan and its active components. It could lay the foundation for the development of modern Chinese medicine to prevent and cure spontaneous abortion,and also provide a new way of thinking to prevent and cure the disease.

在前期研究（寿胎丸对反复自然流产小鼠蜕膜蛋白质组的研究-国家自然基金30973771）的基础上，建立肾虚黄体抑制流产大鼠模型，基于代谢组学的研究方法，以核磁共振（NMR），液相色谱－质谱联用（LC-MS）、液相色谱/飞行时间质谱（LC-TOF/MS）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱-二极管阵列检测（HPLC-DAD）、生物信息学等现代技术，通过对血浆、尿液代谢组的分析，获得寿胎丸及活性成分在模型大鼠给药前后的代谢物指纹图谱；分析代谢指纹图谱变化的原因，确定寿胎丸及活性成分对模型大鼠的作用密切相关的代谢组学特征和小分子标志化合物；阐明药物作用靶点及作用机理，探讨寿胎丸及活性成分的药效物质基础和安胎作用机制。为防治自然流产开发出现代中药奠定基础，并为中药防治自然流产提供新的研究思路。

背景：反复自然流产（RSA）是一种常见的病理性妊娠，发生率高，严重危害了妇女的生殖健康。本课题以代谢组学方法探讨寿胎丸治疗自然流产机制和物质基础，提高中药防治自然流产的水平，对人类生殖健康具有重要的现实意义。.方向：基于代谢组学的研究方法，探讨寿胎丸的药效物质基础和安胎作用机制。为防治自然流产开发中药新药奠定基础，并为防治自然流产提供新的研究思路。.完成情况：按任务书的要求，基于代谢组学的研究方法，通过对血浆、尿液代谢组的分析，获得寿胎丸及活性成分在模型大鼠给药前后的代谢物指纹图谱；分析代谢指纹图谱变化的原因，确定寿胎丸及活性成分对模型大鼠的作用密切相关的代谢组学特征和小分子标志化合物。.取得结果：采用GC-MS技术确立了在寿胎丸脂肪油组分的甲酯化方法为1%H2SO4-CH3OH酯化法，油酸和棕榈酸是寿胎丸脂肪油组分的主要成分；利用HPLC技术发现寿胎丸的低极性部位安胎作用的物质基础可能以脂肪酸为主，其主要成分以油酸、棕榈酸为主；确定了寿胎丸中的7个特征成分，其中对香豆酸、金丝桃苷、槲皮素、山奈酚归属于菟丝子，槲皮苷归属于菟丝子和桑寄生，绿原酸归属于菟丝子和续断，川续断皂苷Ⅵ归属于续断；建立了寿胎丸中黄酮类化合物金丝桃苷、山奈酚及三萜皂苷类成分川续断皂苷Ⅵ在同一检测波长的含量测定方法；采用GC-MS技术检测大鼠尿液代谢产物确定了寿胎丸有效差异物分别是：C9H20N9O3S、5-甲氧基吲哚乙酸、C15H4O6、C11H12N7；寿胎丸可能通过下调体内5-MIAA的代谢，影响胎盘中5-羟色胺（5-HT）、褪黑素（MT）的合成，起到安胎的功效；初步确定了寿胎丸丙氨酸、缬氨酸、乳酸、络氨酸、葡萄糖二酸等差异代谢产物；采用GC-MS技术检测大鼠血浆的代谢产物确定了寿胎丸差异的生物标记物有苯丙氨酸，甘草酸，庚酸，L-2-氨基丁酸，Monomethylphosphate。此五种物质有可能作为寿胎丸干预肾虚型流产大鼠代谢性生物标记物,通过不同代谢通路发挥其治疗作用。.取得成果：公开发表论文1篇，待发表论文1篇。已培养硕士3名。